酶聯免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作,可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質、多肽、抗體這一基本問題,是實驗室比較常用的一種檢測方法。
而這種簡單的分析方法的核心,就是標準曲線。沒有它,我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它,我們可以深入研究生物反應的細節。
了解更多ELISA試劑盒的保質期一般都是在一年,如果保存得當的話,不會出現問題的。但不要反復凍融。當然如果是正常的DAS-ELISA檢測試劑盒等,應該放在4℃左右冰箱保存。建議ELISA試劑盒解凍后一次用完。已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,ELISA檢測試劑盒開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
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ELISA試劑盒ELISA空白對照有幾種:
1. 空氣空白\水空白:一般是用于儀器調零的,所有孔數值減掉該孔數值。
2.底物空白:一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數偏高,同樣所有孔數值減掉該孔數值(只加底物和終止液)
3. 酶空白:一般在2步法實驗中使用,主要是看酶是否和板有非特異性結合的,一般不做這個 。
了解更多酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay),簡稱ELISA,是實驗室最常用的檢測方法。ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后,既不影響抗原抗體反應的特異性,也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存等優點,適合于大批標本的檢測,廣泛應用于食品安全檢測、醫療檢測以及免疫實驗分析等領域。
了解更多酶標板作為ELISA檢測實驗中的輔材,起著舉足輕重的作用并直接影響最終實驗結果,酶標板的好壞主要取決于其對蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購酶標板批次間的差異。因此,選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標板產品,是實驗者獲得可靠、穩定實驗結果的保障。
了解更多ELISA實驗操作所要求的條件是比較嚴格的,無論是對實驗的硬件條件還是對實驗的操作人員的技術要求,都是如此。下面所提到的就是一些在進行ELISA實驗時所要注意的一些問題。
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ELISA試驗結果的判斷主要根據所做實驗的說明書進行,現一般按S/CO進行判斷,其中S為樣品吸光度,CO為K*陰性對照,K值依據所做實驗有所不同。如果沒有光度計(酶標儀)靠肉眼判斷,則陰、陽性判斷主要靠經驗。ELISA常用結果判定方法如下:1、 定性測定2、定量測定
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定性測定的結果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結果,即用滴度來表示反應的強度,其實質仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標本作一系列稀釋后進行試驗,呈陽性反應的最高稀釋度即為滴度。根據滴度的高低,可以判斷標本反應性的強弱,這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。
了解更多以已知抗體(抗HBs)包被載體,然后將含有抗原的待檢標本加入,共同孵育后,抗原結合于包被抗體上,再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs),酶標抗體連接到抗原上,最后加入底物溶液,根據顏色反應來判定抗原含量。
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