ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?最近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總如下:
1、ELISA實驗包被緩沖液
2、ELISA實驗洗滌緩沖液
3、ELISA實驗稀釋液
4、ELISA實驗終止液
5、ELISA底物緩沖液
6、ELISA實驗TMB四甲基聯苯胺、使用液
7、ELISA實驗ABTS使用液
8、ELISC
試劑
1、ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
NaHCO3 |
1.59g |
NaHCO3 |
2.93g |
加蒸餾水至1000ml |
2、ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M
KH2PO4 |
0.2g |
Na2HPO4·12H2O |
2.9g |
NaCl |
8g |
KCl |
0.2g |
Tween-20 0.05% |
0.5ml |
加蒸餾水至1000ml |
3、ELISA實驗稀釋液:
牛血清白蛋白(BSA) 0.1g
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
4、ELISA實驗終止液(2M H2SO4):
蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸98%、21.7ml。
5、ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
0.2M Na2HPO4(28.4g/L) |
25.7ml |
0.1M 檸檬酸(19.2g/L) |
24.3ml |
加蒸餾水50ml |
6、ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml無水乙醇) |
0.5ml |
底物緩沖液(PH5.5) |
10ml |
0.75%H2O2 |
32μl |
7、ELISA實驗ABTS使用液:
ABTS |
0.5mg |
底物緩沖液(PH5.5) |
1ml |
3%H2O2 |
2μl |
8、ELISA實驗封閉液:
牛血清白蛋白(BSA) 5g
加洗滌緩沖液至100ml
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。
為了保證ELISA實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。
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